Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. CampioneCullizzioni:U specimenu deve esse cullatu in tubi sterili in cunfurmità

cù specificazioni tecniche standard.

2. Preparazione di reagenti (Zona di preparazione di reagenti)

Pigliate i cumpunenti di u kit, equilibrate à a temperatura di l'ambienti per l'usu standby.

3. Trattamentu di Esemplari (Area di Trattamentu di Specimen)

3.1 Estrazione di l'acidu nucleicu

Hè cunsigliatu di piglià 200μL di campioni di liquidu, Control Positivu è Controlu Negativu per l'estrazione di l'acidu nucleicu, secondu i requisiti currispondenti è e prucedure di i kit di estrazione di DNA virali.

3.2 Dissoluzione di polvere liofilizzata è aghjunta di mudelli

Preparate Monkeypox Virus Lyophilized premix secondu u numeru di campioni.Un campione hà bisognu di un tubu PCR chì cuntene polvere di premix liofilizzata.U cuntrollu negativu è u cuntrollu pusitivu deve esse trattatu cum'è dui campioni.

(1) Aghjunghjite 15μL di Soluzione di Dissoluzione in ogni tubu PCR chì cuntene una premiscela liofilizzata, poi aghjunghje 5μL di campioni estratti / Controllo Negativu / Controllu Positivu in ogni tubu PCR rispettivamente.

(2) Copri i tubi PCR strettamente, sferisce i tubi PCR a manu finu à chì u polveru liofilizatu hè cumpletamente dissolutu è mischju, raccoglie u liquidu à u fondu di i tubi PCR per centrifugazione istantanea à bassa velocità.

(3) Se utilizate un strumentu PCR in tempu Reale cumuni per a rilevazione, trasferisce direttamente i tubi PCR à l'area di amplificazione;Se utilizate BTK-8 per a rilevazione, allora bisognu di fà e seguenti operazioni: trasferisce 10 μL di liquidu da u tubu PCR à u chip di reazione di BTK-8.Un tubu PCR currisponde à un pozzu nantu à u chip.Durante l'operazione di pipettatura, assicuratevi chì a pipetta hè verticale di 90 gradi.Les pointes de la pipette à barrière d'aérosol doivent être placées au centre du puits avec une force modérée et s'arrêter de pousser la pipette lorsqu'elle atteint la première vitesse (pour éviter les bulles).Dopu chì i pozzi sò pieni, pigliate una membrana di chip di reazione per copre tutti i pozzi è u chip hè trasferitu à l'area di rilevazione di amplificazione.

4. Amplificazione PCR (zona di rilevazione)

4.1 Mettite i tubi PCR / chip di reazione in u tank di reazzione è stabilisce i nomi di ogni reazzione bè in l'ordine currispondente.

4.2 Impostazioni di fluorescenza di rilevazione: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Cuntrollu internu (CY5).

4.3 Eseguite u protokollu di ciclismo seguente

Protocolu di ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protocolu di BTK-8:

5. Analisi di i risultati (per piacè riferite à u Manuale di l'usu di l'instrumentu)

Dopu à a reazione, i risultati seranu salvati automaticamente.Cliccate "Analizà" per analizà, è l'instrumentu interpreterà automaticamente i valori Ct di ogni mostra in a colonna di risultati.I risultati di u cuntrollu negativu è pusitivu sò conformi à i seguenti "6. Control di qualità ".

6. Controlu di qualità

6.1 Cuntrollu Negativu: No Ct o Ct>40 in u canali FAM, Ct≤40 in u canali CY5 cù a curva di amplificazione normale.

6.2 Cuntrollu pusitivu: Ct≤35 in u canali FAM cù a curva di amplificazione normale, Ct≤40 in u canali CY5 cù a curva di amplificazione normale.

6.3 U risultatu hè validu s'è tutti i criteri di sopra hè cumpletu.Altrimenti, u risultatu hè invalidu.

Interpretazione di u risultatu

I seguenti risultati sò pussibuli:

NOTA: Se si verifica un risultatu invalidu, a mostra deve esse recullata è testata di novu.